Digestion par enzymes de restriction Flashcards Preview

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Flashcards in Digestion par enzymes de restriction Deck (13)
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1
Q

Quelle est la méthode d’analyse d’ADN plasmique la plus souvent utilisée?

A

Coupure par une (ou des) enzyme(s) de restriction et séparations des fragments par électrophorèse

2
Q

Quels sont les facteurs qui influencent l’activité enzymatique?

A

Température
pH
Force ionique (Mg2+ essentiel)

3
Q

Quelle est la température optimale de la majorité des enzymes?

A

37 degrés

4
Q

À quoi servent les tampons de réaction à utiliser avec les enzymes vendues commercialement?

A

Procurer les conditions de pH et de force ionique optimales à leur activité

5
Q

Combien de fois plus concentré que la concentration d’utilisation les tampons fournis avec les enzymes sont-ils généralement?

A

10X

6
Q

Comment caractérise-t-on l’ADN avec la digestion enzymatique?

A

ADN est coupé en pls fragments selon le nb de sites de clivage de l’enzyme sur l’ADN
Fragments issus de digestion séparés par électrophorèse sur gel d’agarose à pH basique
Plus grands fragments migrent moins que petits et la longueur de chacun est déduite par comparaison avec série de fragments d’ADN de tailles connues
Établissement d’une carte de restriction

7
Q

Pour établir une carte de restriction détaillant les sites de restriction, la digestion se fait-elle avec une ou plusieurs enzymes à la fois?

A

Plusieurs enzymes à la fois

8
Q

Que contient une bonne préparation d’ADN plasmidique?

A

Surtout de l’ADN superenroulé

Pas d’ADN génomique ou ARN

9
Q

Quelle conformation de plasmide migre le plus loin?

A

Superenroulé

10
Q

Quelle conformation de plasmide migre le moins loin?

A

Relâchée

11
Q

Est-ce que la conformation des plasmides change selon la souche de bactéries utilisée?

A

Oui, le degré de torsion est différent et produit un plasmide plus ou moins enroulé ou compact

12
Q

La conformation linéaire peut-elle migrer plus rapidement que superenroulée?

A

Oui dans certains cas

13
Q

Par quoi est influencée la vitesse de migration des conformations différentes de l’ADN plasmidique?

A

Par conditions d’électrophorèse : courant appliqué et force ionique du tampon d’électrophorèse